Belki bir bilim projesi için bir proteini denatüre etmek istiyorsunuz ya da belki denatüre gıdalar hakkında okudunuz ve bunun nasıl çalıştığını bilmek istiyorsunuz. Denatürasyon, bir proteinin ısı, radyasyon, asitler ve çözücüler dahil olmak üzere dış kuvvetlerin etkileri nedeniyle şeklini ve yapısını kaybetmesi işlemidir. Organik çözücüler genellikle proteinleri denatüre eder. Bir proteini tam olarak denatüre etme yönteminiz, birlikte çalışmak istediğinize bağlıdır, çünkü hepsi farklı seviyelerde farklı denatüre edici maddeler gerektirir. Bununla birlikte, protein ortamında neyi değiştireceğinizi biliyorsanız, herhangi bir proteinin çoğu denatüre edilebilir.
adımlar
Yöntem 1/2: Bir Proteini Denatüre Etme
Adım 1. Isıyı kullanın
Isı, bir proteini denatüre etmenin en kolay ve en yaygın yollarından biridir. Söz konusu protein gıdada mevcut olduğunda, sadece yemeği pişirmek proteinleri denatüre edecektir. Birçok protein, 100°C (212°F) veya daha yüksek bir sıcaklığa maruz bırakılarak denatüre edilebilir. Bu, proteinlerin pıhtılaşmasını ve çözünürlüklerini azaltmasını sağlar.
Maruz kalma süresi, ısıya maruz bıraktığınız şeye bağlıdır. Örneğin bir yumurta bir tavada orta ateşte beş dakikada pişebilirken, bir rostoyu fırında pişirmek saatler alabilir
Adım 2. Alkol uygulayın
Alkol, bir peptit bağının amid grupları arasında oluşan hidrojen bağlarını bozar. Bir protein bir alkol çözeltisine maruz kaldığında, alkol molekülleri protein zinciri ile yeni bağlar oluşturur. Bakteri hücre duvarını kırmak ve proteini denatüre etmek için %70 alkol solüsyonu kullanın.
Konsantre alkoller hem yanıcı hem de toksik oldukları için tehlikeli olabilir. Daima eldiven ve göz koruması dahil olmak üzere tam güvenlik ekipmanı kullanın ve güvenli, sıcaklık kontrollü bir ortamda kullanın
Adım 3. pH'ı değiştirin
Bir proteinin iç yapısı, çevresi çok asidik veya çok alkali olduğunda, proteinin tuz köprülerini bir arada tutan iyonik bağları bozduğu için bozulabilir. Proteine bir asit veya baz çözeltisi ekleyin. Denatürasyonu teşvik etmek için çevredeki ortamın pH'ı 10'un üzerinde veya 4'ün altında olmalıdır. Değişikliği asitle sağlıyorsanız, pH 2 ile 5 arasında olmalıdır.
pH'ın değiştirilmesi, o amino asitteki her fonksiyonel grubun pKa'sına bağlı olarak bir amino asidi iyonize edebilir. Amino asitte bulunan amino grubunu veya karboksil grubunu da iyonize edebilirsiniz
Adım 4. Ağır metal tuzlarını deneyin
Ağır metaller proteindeki bağları bozarak yapısını kaybetmesine neden olabilir. Cıva ve kurşun gibi ağır metallerin tuzları, farklı proteinleri denatüre etmek için kullanılabilir. Bu tür tuzlar çoğu kimyasal tedarikçiden temin edilebilir ve her zaman dikkatli ve eldiven ve göz koruması dahil uygun güvenlik ekipmanları ile kullanılmalıdır.
Ağır metaller, kompleksler oluşturmak için bir proteinin fonksiyonel yan zincir gruplarıyla etkileşime girebilir. Ağır metaller ayrıca proteinin amino asit yan zincirlerini oksitler
Yöntem 2/2: Proteinleri Yeniden Doğallaştırma
Adım 1. Bir proteinin yeniden katlanabileceğini belirleyin
Bazı denatürasyon biçimleri kalıcıdır, bazıları ise geri alınabilir. Örneğin bir yumurta veya etin pişirilmesi geri alınamaz, ancak yüksek pH'a maruz kalan bir protein, daha nötr bir ortama konduğunda şeklini yeniden kazanabilir.
Proteinin yeniden katlanıp katlanamayacağı onun DNA'sına bağlı olacaktır. DNA, proteinin doğal durumuna geri dönmesi için gereken bilgiyi tutacaktır
Adım 2. Denatüre edici faktörü çıkarın
Proteinin etrafındaki ortamı durağan hale getirin ve denatüre edici elementi çıkarın. Örneğin asit veya bazı çıkarın veya proteini daha makul bir sıcaklığa getirin.
Adım 3. Bir renatürasyon kiti kullanın
Birçok laboratuvar malzemeleri şirketi, renatürasyonu teşvik etmek için en iyi parametreleri taramanıza izin veren renatürasyon kitleri satmaktadır. Bu tür kitler, özellikle bir laboratuvar veya deneysel ortamda proteinlere bakıyorsanız yardımcı olabilir.
İpuçları
- Denatüre bir protein, doğal durumunda belirgin olan dörtlü, üçüncül ve ikincil yapısını kaybeder, ancak birincil yapısı kalacaktır.
- Denatüre bir protein, bazı durumlarda, enzimlerde olduğu gibi, işlev yeteneğini kaybederek, biyoaktivitesinin bir kısmını da kaybeder. Örneğin, substratlar artık denatüre edilmiş enzimlere bağlanamayabilir.
- Denatüre protein, bir çözelti içinde çözünürlüğünü kaybedebilir.
- Ayrıca iplikleri ayırmak için laboratuvar tekniklerini kullanarak nükleik asitleri denatüre edebilirsiniz.
